不用担心处理后的稀有单细胞会丢失了
永远不要再失去你的稀有细胞：无论分离、染色或是分离单个细胞
带有SIEVEWELL™ 芯片的新一代纳米孔阵列现已上市。SIEVEWELL™ 是一种新颖的腔室玻片设计，在液室底部有一个额外的纳米孔结构。每一个单独的纳米孔底部都有两个微孔，它们与下面的一个小液体微腔相连。这样可以捕捉纳米孔内的细胞，并从液室顶部产生单向流动，通过孔隙进入下方的液体微腔。由于这种设计，现在不仅可以分离单个细胞并在纳米孔中捕获它们，而且可以直接在这些孔内处理它们，例如抗体标记、染色、洗涤等，而不会丢失任何细胞。这种完全无细胞损耗的芯片上处理方式使SIEVEWELL™ 这项技术对稀有单细胞应用非常有吸引力，例如分离循环肿瘤细胞、胎儿细胞和其他细胞。
这种专利设计的芯片与CellCelector™ 技术相结合实现单个细胞的全自动识别，并100%分离出所需的靶细胞。
SIEVEWELL™: 技术细节和特点
细节
- 标准显微镜载玻片规格
- 生物相容性、非细胞毒性材料
- 纳米孔薄膜
- 超低附着表面
- 纳米孔的尺寸：20µm宽和25µm深。非常适合高效的单细胞捕获。
- 每个芯片具有370000个纳米孔（17 x 17毫米）
- 六边形的纳米孔是自动细胞检测和细胞计数的理想选择。
- 在每个纳米孔的底部有两个直径为2µm的微孔，可以方便液体流过，同时有效地保留细胞。
SIEVEWELL™ 薄膜的结构，顶部视角
SIEVEWELL™ 薄膜的结构，侧面视角
白光视野下SIEVEWELL™ 薄膜，纳米孔底部的微孔清晰可见
SIEVEWELL™ 薄膜光学特性
- 白光视野显微镜中的高透明度。
- 自发荧光信号非常低
SIEVEWELL™ 技术非常适合于显微镜和光学测量，获取高质量的显微成像数据。
SIEVEWELL™: 工作原理
在SIEVEWELL™ 芯片的370000个纳米孔中，两个直径为2µm的微孔位于纳米孔的底部。它们连接芯片上方和下方的流体部分。纳米孔下方的流体通过位于芯片膜下方的一个液体微腔连接到两侧端口。
将细胞悬浮液铺到芯片上后，可以通过使用标准的微量移液器抽吸液体来产生和控制从内部液室到侧端口的单向流体流。这些细胞将跟随液体流动并被困在纳米孔中。当一个细胞进入纳米孔时，它会堵塞微孔，从而减少通过纳米孔的液体流量。因此，其他细胞会自动转向其他空的纳米孔，从而形成一个自隔离纳米孔阵列。细胞装载后，在细胞固定、破膜、封闭、孵育和洗涤过程中，可以用同样的方法直接在芯片上染色，而不会造成任何细胞丢失。
SIEVEWELL™ 无损失单细胞分离的片上染色工作流程
步骤一 装填细胞
步骤二 染色
步骤二 染色
步骤三 检测
步骤三 检测
步骤四 回收
步骤四 回收
步骤五 下游分析
步骤五 下游分析
装填细胞
将富集的或处理过的单细胞悬液加入芯片， SIEVEWELL™ 技术适用于活细胞和固定细胞
步骤一
单细胞悬液被加入到SIEVEWELL™ 芯片腔室内
步骤二
从芯片侧端吸走缓冲液
通过微量移液器抽吸，从内腔产生定向流动，通过每个纳米孔底部的两个微孔，流向侧端口的移液器。
细胞随液体流动向下移动并被困在纳米孔内，由于底部微孔足够小，可以避免细胞通过。
纳米孔的尺寸使得每个孔只能捕获一个细胞。进入纳米孔后，细胞会堵塞底部微孔，从而减少通过纳米孔的液体流量。由于这一点，下面的细胞会自动重新定向到周围的空纳米孔中，从而实现了一种非常高效的自隔离单细胞捕获。
A549 细胞加入到SIEVEWELL™ 芯片
细胞染色和清洗
加入试剂、孵育、洗涤，细胞染色不丢失。在染色前也可以在装置内先进行固定。
步骤一
将试剂和洗液加入到SIEVEWELL™芯片腔室内
右图：洗涤前的荧光图像
步骤二
多余的试剂或洗涤缓冲液将从SIEVEWELL™ 芯片的侧端口吸走。由于细胞被困在纳米孔中，这个过程中不会丢失任何细胞。
右图：洗涤后的荧光图像
检测
使用Cellcellector™ 扫描芯片检测目标细胞。细胞被固定在纳米孔中，在扫描过程中保持位置不变。
由于SIEVEWELL™ 芯片平整度高，在扫描整个芯片过程中不会失焦。
使用CellCelector™ 扫描
蓝色：DAPI; 绿色：A549 红色 Namala细胞
从纳米孔内捕获CTC细胞
回收
将靶细胞转移到PCR管或细胞培养板上。SIEVEWELL™ 芯片经过特别优化，可与全自动单细胞捕获系统ALS CellCelector™ 配合使用。
使用ALS CellCelector™ 回收单细胞
分离A549细胞到目的孔
下游分析
SIEVEWELL™ 技术兼容下游单细胞DNA二代测序、RNA测序等分子生物学分析方法。回收后的活细胞可克隆。
用GAPDH基因特异性引物进行单细胞RT-PCR。
PC：阳性对照，收集A549细胞的c-DNA
NC：阴性对照，裂解缓冲液
相关参考文献
- Ladurner M. et al. Validation of Cell-Free RNA and Circulating Tumor Cells for Molecular Marker Analysis in Metastatic Prostate Cancer Biomedicines. 2021 Aug 12;9(8):1004
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