正確な数の細胞の分離
検証実験の正確なセル数を取得する
濃縮率の測定や感度と特異性の評価などの多くのアプリケーションでは、リファレンスサンプル用の高品質のスパイクインを作成するために正確な数の細胞が必要です。FACSやシングルセルプリンターのような従来のセルソーティング技術は、目的のウェル／チューブへそのような正確な数の細胞の分配を保証することはできません。
ALS CellCelector™ プラットフォームと当社のナノウェルプレートテクノロジーを組み合わせることで、正確な数の細胞を非常に正確かつ穏やかに分離できます。たとえば、アッセイに1、5、10、50、または100個の細胞の正確なカウントが必要な場合、CellCelectorはそ無傷の細胞を正確に取得することが可能です。
図1. ALS CellCelector™ により、細胞を標準またはカスタムのプレート、チューブ、またはバイアルに分離できます。
ワークフロー
当社のCellCelector™ 正確な数の細胞を分離するためのアプローチは、（i）CellCelector™S200ULAナノウェルプレートにナノウェルあたりの標的細胞数に対応する細胞密度で細胞を播種することから始まります。（ii）ナノウェル内の細胞の自動スキャンおよびカウント。（iii）標的細胞番号が入力されたナノウェルの自動選択。（iv）オペレーターによるリストの検証。（v）プロセス全体を完全に追跡しながら、選択した細胞セットを目的のチューブ/ウェルに自動転送します（図2）。
図2. 正確な数の細胞を自動分離するためのCellCelector™によるワークフロー
細胞播種統計
シングル細胞懸濁液をナノウェルプレートに播種すると、細胞はナノウェル内にランダムに捕捉されます。理想的には、完全なシングル細胞懸濁液の均一な播種は、標準的なポアソン分布に従います。ここで、ナノウェル内の特定の数の細胞（k）をランダムにキャプチャする確率（p）は、次の式で表されます。
ここで、λはナノウェルあたりの播種された細胞の平均数です。図3は、いくつかの細胞播種密度について、S200 24ナノウェルプレートの1つのウェルにおける理論的および測定された細胞分布の両方を示しています。これにより、ナノウェル内に必要な量の細胞を捕捉する確率を最大化するために必要な、24ウェルプレートの各ウェルに播種する細胞の数を計算できます。
図3. ナノウェルあたり1、5、10、および20細胞の播種細胞密度の理論（線）および実験（点）ポアソン分布。スキャンおよび分析されたナノウェルの総数は2,500です。
自動化されたウェルスキャンと細胞カウント
細胞が蛍光標識されている場合（たとえばCellTracker™ 色素で）、播種されたウェルをBFおよび任意の蛍光チャネル（図3および図4）でスキャンできます。細胞カウントは、BFモードと蛍光モードの両方で実行できます。細胞数を数えた後、ユーザーはナノウェル画像のギャラリーですべてのナノウェルの画像を確認できます。
図4. FITCチャネルでスキャンされた1つのウェルの概要画像。円はスキャンおよび分析領域を視覚化します。
図5. ナノウェルあたり20個の染色されたSK-BR-3細胞の平均細胞密度を持つ200µmナノウェルの典型的な細胞分布。左：明視野、右：FITC。
図6. CellCelectorソフトウェアによって自動的に選択された5つのセルを備えた12のナノウェルの例。
自動回収（ピッキング）
オペレーターが回収するナノウェルのリストを検証すると、システムは選択されたすべてのナノウェルから自動的に選択します。ピッキング中、システムは品質管理の目的で画像をピッキングする前後に自動的に保存します。このシステムでは、複数のナノウェルの内容物を1つの目的のチューブにプールして、より多くの細胞を沈着させることもできます。たとえば、20細胞= 2ナノウェルx10細胞、100細胞= 5ナノウェルx20細胞です。
図7. 20個のセルのセットを選択する例。画像を選択する前後は自動的に保存されます。
図8. 光学的平底PCRチューブに沈着した20個の細胞の検出。
採取した細胞の100％が目的のウェルに沈着します。細胞を平底プレートまたはチューブに移すと、CellCelector™ を用いて、沈着した細胞を簡単に視覚化およびカウントできます。（図8）
ドキュメンテーション
ユーザーは、ソースプレートとデスティネーションプレートの完全な追跡情報を含むすべての数値データ、およびピッキングされたナノウェルに関連するすべての画像（スキャン、ピッキングの前後など）をエクスポートできます。
図9. 目的の96ウェルプレートの特定のウェルに分離された細胞のセットに対応する、ピッキング前のナノウェル画像のギャラリーの例。
CellCelector™による正確な数の細胞を分離するためのワークフローにおける利点
パフォーマンス
- 非常に正確な数のセルをシングル細胞に分離することを保証する唯一のシステムです。
- 信頼性の高い画像ベースの確認：隠された細胞は存在しません。
- 100％のピッキング効率：細胞が取り残されたり失われたりすることはありません。
- 細胞にとても優しい。
柔軟性
- あらゆるセルサイズとタイプに対応します。
- 固定細胞と生細胞の両方で機能します。
- 明視野および/または蛍光での自動細胞カウントが行えます・
- 分配プレート全体で同一のセル番号またはセル番号シリーズの作成ができます。例： 1、2、5、10、20、セル
- 一定の比率でのいくつかの細胞集団の混合が可能です
使いやすい
- 簡単なサンプル準備
- ユーザーフレンドリーなソフトウェア
- 定期的なメンテナンスは不要
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