neCTC-BC-キット
乳がんにおける循環腫瘍細胞のEpCAM非依存性分離
新しい分離キットと実績のあるCellCelector™テクノロジーを組み合わせることにより、リキッドバイオプシーからの100％純粋な乳がん細胞の分離を最適化します。
患者のサンプルに由来する複雑な細胞集団からの（まれな）単一循環腫瘍細胞（CTC）の高精度な分離が容易に利用できるようになりました。ただし、ほとんどの抗体ベースの分離ソリューションは、上皮細胞接着分子（EpCAM）を発現するCTCを対象としています。このアプローチは、上皮間葉転換（EMT）によって生成されたCTC亜集団を表す可能性のあるEpCAM低細胞または陰性細胞を無視します。公表されたデータは、EMTが腫瘍抵抗性に寄与している可能性があり1,2,3、腫瘍細胞の幹細胞性にも関連している可能性があることを示唆しています4,5。
1Fischer KR, Durrans A, Lee S, et al. Epithelial-to-mesenchymal transition is not required for lung metastasis but contributes to chemoresistance. Nature. 2015;527:472–476.
2Zhuo W, Wang Y, Zhuo X, et al. Knockdown of Snail, a novel zinc finger transcription factor, via RNA interference increases A549 cell sensitivity to cisplatin via JNK/mitochondrial pathway. Lung Cancer. 2008;62:8–14.
3Zheng X, Carstens JL, Kim J, et al. Epithelial-to-mesenchymal transition is dispensable for metastasis but induces chemoresistance in pancreatic cancer. Nature. 2015;527:525–530.
4Mani SA, Guo W, Liao MJ, et al. The epithelial-mesenchymal transition generates cells with properties of stem cells. Cell. 2008;133:704–715.
5Liu S, Cong Y, Wang D, et al. Breast cancer stem cells transition between epithelial and mesenchymal states reflective of their normal counterparts. Stem Cell Reports. 2014;2:78–91.
自動化された単一細胞スクリーニングおよびピッキングシステムであるALSCellCelector ™と組み合わせることで、neCTC-BC-Kitは、独自のラボで、最先端の細胞および分子生物学研究所のパートナー。または当社が提供するサービスとして、すべてのEpCAM発現レベルで乳がんCTCを分離する優れた方法を提供します。
neCTC-BC-Kitは、磁性ビーズ+磁性流体に基づいており、細胞表面タンパク質に特異的な2つの抗体の組み合わせを利用します。そのパフォーマンスは、パートナーラボでテストおよび検証されており、次の主な利点があります。
1) 抗体ミックスはEpCAM陽性とEpCAM陰性の両方の腫瘍細胞を捕捉します
図1は、neCTC-BC-Kitで使用される2つの抗体が、EpCAM陽性（T47d、Sk-Br-3、MCF-7）とEpCAM陰性（MDA-MB-231）の両方の腫瘍細胞に結合できることを示しています。
図1：選択した抗体はEpCAM陽性とEpCAM陰性の両方の乳がん細胞株を検出します
図2：選択した抗体の組み合わせは、単一の捕捉試薬として使用されるよりも相乗的に多くのCTCを検出します
2) 2つの抗体は相乗作用で腫瘍細胞を捕捉します
乳がん患者の血液サンプルを使用したneCTC-BC-Kitのパフォーマンスは重要です。この目的のために、キットは3人の乳がん患者の7.5mlの末梢血でテストされました。両方の抗体はCTCを捕捉できますが、両方の抗体を同時に使用すると、細胞収量が大幅に増加します。抗体の組み合わせには相乗効果があります。
3) 濃縮されたCTCは、EpCAM発現に関して幅広いスペクトルを示します
neCTC-BC-Kitは、EpCAM陽性とEpCAM陰性の両方のCTCを検出するためにテストされました。図3は、neCTC-BC-Kitで検出されたCTCが、「ネガティブ」から「ハイ」までの全範囲でEpCAMを発現していることを示しています。
図3：選択された抗体の組み合わせは、EpCAM発現の幅広い連続性を持つCTCを検出します
図4：選択された抗体の組み合わせがCTCを検出し、ローパスシーケンシングによって検証されます
4) ローパスシーケンシングを使用すると、濃縮された細胞が腫瘍細胞であることを示すことができます。
個々のCTCはALSCellCelector ™で分離され、増幅されました。ゲノムDNAは低解像度（ローパス）でシーケンスされました。
図4は、これらの細胞が乳がんに由来するという証拠を提供するゲノムDNAの異常を示しています。
概要
neCTC-BC-Kitは、広範囲のEpCAM発現を伴う乳がん患者の血液中のCTCを相乗的に検出および捕捉することができ、同じ患者の血液サンプルから異なるEpCAM発現レベルのCTCを分離および分析することができます。
neCTC-BC-Kitは、さまざまな種類の磁性ビーズまたは磁性流体を利用して提供でき、ハンドヘルド磁石を使用するアプリケーションや自動CTC分離システムでの使用を可能にします。抗体は、直接および間接の細胞捕捉を可能にするために、別々の混合物として提供されます。オプションで、EpCAM陽性およびEpCAM陰性の乳がん細胞株の正確な数を含むコントロールサンプルを提供して、捕捉効率を検証することができます。
neCTC-BC-Kitを使用すると、高価な機器を必要とせずに、EpCAMの発現レベルとは無関係に乳がんサンプルからCTCを簡単に分離できるようになります。ハンドヘルドマグネットを使用するだけで、マイクロマニピュレーションによる精製の準備ができるまでサンプルを濃縮することができます。これは、ALSCellCelector ™テクノロジーを使用して手動または完全に自動で実行できます。
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